随着基因工程、分子生物学和基因组学的研究发展，生物技术药物也迅速发展起来。抗体药物已经成为发展最快的治疗性药物。抗体是由Fab片段和Fc片段两个部分组成。Fab片段与抗原结合发挥作用，Fc片段通过与免疫细胞上表达的FcγR相互作用，从而激活效应细胞的吞噬作用和补体效应等多种免疫途径，从而杀伤肿瘤细胞。除免疫检查点靶向外，ADCC、ADCP和CDC是抗体介导免疫治疗的重要机制（如下图）。对于ADCC和ADCP，在结合靶抗原后，抗体的Fc段募集FcγR表达的效应细胞，包括NK细胞和巨噬细胞，并诱导释放细胞毒性颗粒和吞噬作用以增强变异细胞的清除。对于CDC，一旦抗体的Fc部分与C1q结合，一系列补体就会被激活并产生膜攻击复合物(MAC)，该复合物可以通过破坏细胞膜来杀死靶细胞。
传统的依赖于NK细胞毒性ADCC检测过程分为三个重要组成部分：单抗药物、效应细胞和靶细胞。因此，体外实验一般包括靶细胞的确定（细胞表面高表达单抗可识别抗原）、效应细胞的选择和靶细胞活性的检测。
1、效应细胞
众所周知，ADCC/ADCP 主要由NK细胞驱动。因此，传统的ADCC/ADCP的检测会使用原代NK细胞作为效应细胞检测靶细胞的杀伤或者吞噬效应。原始的NK细胞需要单独或者从人血液中分离的外周血单核细胞(PBMC)培养物中获取，原代细胞被认为最接近生理环境，但基于它们的测定容易出现供体间的变异以及自身变异，从而导致ADCC的检测重复性差。
2、靶细胞
通常会选择肿瘤细胞或者过表达靶点的细胞系作为靶细胞。
3、检测方法
（1）将具有放射性的铬51与靶细胞孵育，铬51会进入靶细胞；洗去多于未进入细胞的铬51，再将靶细胞和效应细胞以及抗体共同孵育。如果靶细胞被杀伤，铬51就会被释放出来，检测溶液中的放射性同位素含量即可确认靶细胞被杀伤的情况。该方法是ADCC检测靶细胞被杀伤的金标准，然而因为带有放射性元素、费时费力且实验变化性大而较少使用。（2）靶细胞被杀伤后细胞膜破损，靶细胞内的乳酸脱氢酶（LDH）或蛋白酶（Protease）会释放到上清液中，可以通过定量检测这些物质的含量来评估靶细胞被杀伤的程度。现有的检测乳酸脱氢酶的方法有比色法、荧光法和生物发光法等。（3）选择一种染料标记靶细胞（例如，CFSE），另一种染料标记死细胞（例如，FVD），利用流式细胞仪来定量死亡的靶细胞（两种染料均发光）的含量，从而评估靶细胞的杀伤能力。
近些年，随着基因工程的发展，报告基因法逐渐应用于抗体药物的生物学活性检测，下面表格中列举了报告基因法在生物药活性检测方面的应用。
报告基因法是利用分子生物学手段，将报告基因整合到待检测的细胞中，通过检测报告基因产生的信号来研究特定的生物学过程。抗体药物发挥作用是通过诱导细胞产生生物学应答，这个过程中涉及特定信号通路的活化和传导，利用报告基因法则可以通过报告基因信号的分析，从而间接测定抗体药的生物学活性。
1、检测细胞的选择
为了构建稳定性高的方法，检测所用细胞一般选用能够稳定传代的细胞系或细胞株，以方便报告基因的转基因操作和细胞的克隆化。由原代细胞或不稳定的细胞系构建的报告细胞，无法保证本次检测时细胞的状态一致，也就无法准确、定量地反映待测药品的质量。同时，检测用细胞还要尽量考虑是待测药物的靶细胞，药物刺激与靶细胞产生的变化相关，这样能更加真实地反映待测药物的活性，也便于与其他方法进行比较。
2、报告基因的选择
报告基因是编码基因，其编码产物可以是某些蛋白或酶类。选择报告基因的原则，一是要考虑报告基因的表达是否对宿主细胞有影响，是否有内源性活性的干扰；二是要考虑报告基因检测信号的类型和相应的检测方法是否成熟。常用的报告基因有CAT (氯霉素乙酰基转移酶) 、SEAP (分泌型碱性磷酸酶) 、GFP (绿色荧光蛋白) 、β-半乳糖苷酶、GUS (葡萄糖醛酸酶) 等。但相对于其他报告基因，萤光素酶具有诸多优势：检测灵敏度高，如萤火虫萤光素酶的检测灵敏度可达10-20mol，灵敏度约为CAT的100倍，信号半衰期可维持数小时;检测范围宽，可达7～8个数量级;与β半乳糖苷酶相比，哺乳动物细胞无内源性萤光素酶活性；有多种商品化萤光素酶检测系统可选。
3、信号通路的选择
药物作用于细胞，细胞内会产生多种效应，最终表现可能是促进细胞增殖，或抑制细胞增殖、产生细胞毒效应或抗病毒效应等。在分子层面上, 这些表型的背后势必涉及多条信号通路的协同、竞争和整合。因此，应尽量选择与最终细胞表型相关、最能反映药品药理性质的通路。
Rhinogen® ADCC Reporter Bioassay生物发光报告基因法，基于NFAT（Nuclear factor of activated T-cells）反应通路，采用基因工程改造的Jurkat细胞作为效应细胞，该细胞稳定表达FcγRIIIa受体（V158高亲和力突变体）和由NFAT应答元件驱动表达的萤火虫萤光素酶。抗体通过与效应细胞表面FcγRIIIa的结合，激发细胞内NFAT反应元件，NFAT反应元件则驱动萤火虫荧光素酶的表达。利用荧光素酶活性检测试剂实现定量分析。
生物学活性的测定方法多种多样，而报告基因法因其检测灵敏度高、检测周期短、检测方法干扰少被广泛用于生物药的生物学活性检测。报告基因法在2015版《中国药典》被收录为Ⅰ型干扰素活性测定的标准方法之一，基于此的生物学测定方法应用范围逐渐扩大，应用前景广阔。
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参考文献
[1] 牛安娜,苏昕,张晓鹏.报告基因法在生物技术药物活性检测中的应用[J].生物技术通讯,2019,30(02):296-300.
[2] W.Z Chen. Antibody and antibody fragments for cancer immunotherapy, Journal of Controlled Release Volume 328, 10 December 2020, Pages 395-406.
[3] https://www.1633.com/article/61489.html